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本产品是用于赭曲霉毒素A定量分析的酶联免疫试剂盒。
试剂盒包含 96 孔或 48 孔测试所需的试剂，包括标准品。
需要实验室配备酶标仪。

检测范围:谷物，麦麸。

样品前处理
   粉碎，甲醇水提取，过滤。

检测时间: 20 分钟 (不包括样品前处理时间)。

检出限
   谷物：2 ppb
   麦麸：4 ppb

1.检测原理   该实验是在包被有抗赭曲霉毒素抗体的微孔中进行的，在预混合孔中，将标记的赭曲霉毒素和标准溶液或样品混合，然后转移到抗赭曲霉毒素微孔板中.在孵育期间，游离赭曲霉毒素和酶标记赭曲霉毒素竞争固相上的抗赭曲霉毒素抗体结合位点。
然后在洗涤步骤中除去任何未结合的酶耦合物和赭曲霉毒素分子。加入固定量的生色底物，将无色色原体转化为蓝色产物。终止液的添加导致颜色从蓝色变为黄色。
用酶标仪在450nm处测量吸光度。溶液颜色的深浅与标准溶液/样品中的赭曲霉毒素浓度成反比。

2.给予的试剂

给予的试剂
预混微孔板：未包被的空白孔	微孔板：包被有抗玉米赤霉烯酮抗体的微孔板，置于装有 干燥剂的铝箔袋中； 微孔板可独立拆分，单独使用。
赭曲霉毒素 A 标准品： 5瓶，浓度分别为 0 ppb; 2 ppb; 5 ppb; 25 ppb; 50 ppb	酶耦合物稀释液：1 瓶
酶耦合物： 1瓶，200 ul	洗涤缓冲液 10x： 1瓶, 50 ml.
终止液： 白色盖子的玻璃瓶	开展液： 1 瓶

3.未给予的试剂及耗材

未给予的试剂及设备
NaCl	霉菌毒素提取液 A 或70% 甲醇
去离子水或蒸馏水	天平
振荡器	粉碎机或研磨机
滤纸 (Whatman 1)，漏斗	20-200 µl, 100-1000 µl 微量可调移液器及配套枪头
酶标仪（450nm）	50-300 µl 多通道微量可调移液器及配套枪头

4.使用者注意事项

①仅供体外诊断使用。
②部分试剂含有防腐剂，终止液含有硫酸并且有刺激性；标准品中包含甲醇而易燃。小心处理试剂，避免接触皮肤、眼睛和黏。

5.处理和存储说明

①在2 ~ 8℃保存，不能冷冻。
② 将未使用的微孔板放回到装有干燥剂的铝箔袋中。
③ 不要使用过期的产品。
④ 不要混合不同批次的试剂。
⑤ 请使用使用试剂盒内附带的说明书。

6.样品处理

⑴谷物

- 充分混匀待测样品。
- 细细粉碎样品。
- 称取粉碎后的样品，选择下表中描述的任一选项。

样品量	NaCl	提取溶液
50 g	10 g	250 ml 70% 甲醇
5 g	1 g	25 ml 70% 甲醇
50 g	/	250 ml 70% 甲醇, 4% NaCl
5 g	/	25ml 70% 甲醇, 4% NaCl

用 70%甲醇 和 4% NaCl制备提取溶液：

100 ml 溶液为例：将4克NaCl溶解在20ml 去离子水或蒸 馏水中，加入70 ml 甲醇， 然后加入去离子水或蒸馏水至 100ml.

①充分振荡 3 分钟。
②过滤样品 (Whatman 1) 并收集滤液。
③滤液可直接用于实验分析. 为 了使样品更具有代表性，建议选择称取50g样品的方式.

⑵麦麸

①分混匀待测样品。
②细细粉碎样品。
③称取 5 g 样品并添加 50 ml 70%甲醇 。
④充分振荡 3 分钟。
⑤过滤样品 (Whatman 1) 并收集滤液。
⑥滤液可用于实验分析，稀释因子是2. 为了使样品更具有代表性，建议选择称取50g样品的方式.

7.实验前的准备工作

①赭曲霉毒素标准品：即时使用;使用前混匀
②酶耦合物稀释液：即时使用.
③酶耦合物：计算并准备实验所需的用量
④用酶耦合物稀释剂稀释200倍.
注意：陆续在稀释两次，确保取到浓缩的酶耦合物的量＞20 ul。
例如：制备半浓缩物1/10（取50μL 浓缩酶耦合物+ 450μL 酶耦合物稀释液），顺利获得稀释半浓缩物1/20（取150μL半浓缩物+2850μL酶耦合物稀释液）制备即用型酶耦合物。
不要涡旋混合
⑤洗涤缓冲液：使用时用蒸馏水1:10稀释缓冲液（1份缓冲液 + 9份蒸馏水）
注意：在晶体存在的情况下，将溶液在室温下搅拌并完全溶解
稀释的洗涤缓冲液在室温下保存24小时，在2-8℃下保存两周.
⑥开展液：即时使用；溶液对光敏感，需避光保存;
⑦终止液：即时使用; 注意：终止液包含 1M 硫酸，小心轻放，如果接触，请用自来水彻底清洗

8.分析过程

(一)初步准备

⑴使用前将所有试剂置于室温，并在室温下保持至 少1小时。
⑵使用后立即将剩余试剂放于 2～8℃ 环境中。
⑶不要更改实验步骤，特别是：
   ①不要延长第一步的孵育时间；
   ②不要在高于25℃和低于18℃的环境中孵育微 孔板 ；
   ③孵育期间不要摇动微孔板；
   ④使用精确的微量移液器和配套枪头。
⑷一旦开始实验，应不间断的完成所有实验步骤。
⑸ELISA结果的可重复性在很大程度上取决于洗涤 微孔板的效率和均匀性；始终遵循说明书中的所 述程序。
⑹每个标准品和样品使用新的一次性吸头，以避免 交叉污染。
⑺不要让吸头接触微孔中已有的液体。
⑻在所有孵育期间避免阳光直射。不能使用密封胶 带覆盖微量滴定板。

9.实验步骤

(1).预先安排好实验流程，记录好每个标准品/样品的位置，如果条件允许，建议做平行实验。把未使用的微孔条放回原来有干燥剂的铝箔袋中，并用夹子夹好同时也准备好同样数量无包被抗体的空白预混合孔. 注意：建议在每次测定中不超过48孔包括标准品）；如果不使用多道移液器，则建议在每次测定不超过16孔（包括标准品）
(2). 添加 100ul 酶耦合物到每个预混合孔中；
(3). 添加 50ul 标准品/样品到相应的预混合孔中；
(4). 使用微量移液枪，混合每个预混合孔的内容物（移液器上下三次），立即将100ul转移到相应的抗T2毒素抗体包被的微孔中；
(5). 室温孵育10分钟；
(6). 不要延长第一步的孵育时间，在孵育过程中不要摇动微孔板；
(7). 洗板
①- 孵育结束后倒掉孔中的液体.
② - 用稀释后的洗涤缓冲液填满微孔，倒掉微孔中的液 体.重复清洗步骤三次.
③ - 将微孔板倒扣在吸水纸上轻轻敲打，清除残留的液 滴.
不要让微孔变干.
(8). 添加100ul开展液到每个微孔中，并彻底混合几秒钟.
(9). 室温下避光孵育 10 分钟.
(10).添加50ul 终止液到每个微孔中，并彻底混合几秒钟.
(11).在450nm 处测定吸光度值.在15分钟内读数.

10.结果计算

   将每个标准品和样品的吸光度值除以标准0（B0）的吸光度并乘以100；因此，最大结合（B0）等于100％，吸光度值以百分比表示

根据每个样品的B/B0值和和赭曲霉毒素标准品浓度绘制标准曲线.

将每个样品的B/B0值插入校准曲线中得到相应浓度,标准品浓度（ppb）已经考虑了样品稀释因子,对小麦、 麸皮样品，将校准曲线上读取的值乘以稀释因子2。

11.标准曲线示例

12.结果评估

在结果出具之后，有必要验证测定性能. 顺利获得将取得的数据与试剂盒中给出的数据进行比较来执行验证（第 12 段）. 如果数值超出给定的规格，建议检查试剂盒的失效日期，吸光度记录的波长以及所用的程序. 如果没有出现操作错误，请联系我们的技术支持.

13.试剂盒参数

㈠分析参数

Bo 吸光度	≥ 0.7 OD450nm
B/Bo 50%	5.5 – 14 ppb

㈡分析性能

基质	Cut off (ppb)	LOQ (ppb)
大麦	3.5	5
小麦	3	4
麦麸	≤4	5

14.责任

使用试剂盒评估为阳性的样品必须用确认方法重新测试。对由于不正确使用该试剂盒而导致的任何客户损失以及因结果而采取的任何行动不承担任何责任.

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