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酵母单杂研讨程

文库建立和文库筛选

验证

互作验证

酵母单杂交服务项目

服务内容	客户需给予	交付结果	价格
文库筛选	1、诱饵基因序列或诱饵质粒 （pHis2-Bait或pAbAi-Bait）； 2、文库质粒（不少于50ug AD文库质粒/每次筛库） （客户最好能给予文库质检相关信息：如物种、库容、文库滴度、文库cDNA片段大概的大小等）	1、质粒在受体菌的阳性菌 2、给予详细的、完整的实验报告，清晰的实验图片 3、筛选结果的测序结果和质粒	在线询价
蛋白-蛋白点对点互作验证	1、pHis2-Bait或pAbAi-Bait和AD-prey质粒 2、或者Bait和Prey序列，质粒由我们构建	1、给予详细的、完整的实验报告，清晰的实验图片 2、在受体菌的阳性菌
自激活和毒性验证	1、pHis2-Bait或pAbAi-Bait质粒 2、或者Bait序列，质粒由我们构建
酵母质粒提取和测序	酵母菌液或者具有菌斑的平板	1、给予详细的、完整的实验报告 2、筛选结果的测序结果和质粒

案例展示

1 诱饵菌株构建

使用BstbI限制性内切酶将4 µg pAbAi重组质粒线性化。

图1. 线性化检测结果：
LineM：1Kb Marker
Line1：为酶切前
Line2：为酶切后

由图1可知c线性化成功，可以进行诱饵菌株构建实验。

2 整合鉴定

图2. 整合鉴定结果：
LineM：2000bp Marker
Line1：阳性对照
Line2：阴性对照
Line3-6：阳性菌株

由图2鉴定结果，pAbAi-peak3诱饵质粒正确整合到Y1H菌株里面，可以进行自激活检测实验。

3 自激活检测

图3.自激活检测结果

自激活检测结果分析：Y1HGold[pAbAi-peak3]在SD/-Ura平板上正常生长，但在SD/-Ura with AbA（100ng/mL）平板上没有生长，所以pAbAi-peak3有自激活，用100 ng/mL AbA进行后续筛选实验。

4 文库筛选

初筛

图4.SD/-Leu with AbA（100ng/mL）初筛图片

二筛

为了去除假阳性，在初筛平板上挑选88个克隆，点板至SD/-Leu with AbA（100ng/mL）平板，进行二次筛选确认。

图5 .SD/-Leu with AbA（100ng/mL）二次筛选图片

二次筛选结果显示：再次划线到SD/-Leu with AbA（100ng/mL）平板上的克隆全部生长，由此可以确认初筛的88个克隆均为阳性克隆。

6 阳性克隆测序

将生长状态良好，且经过复筛的单克隆进行菌落PCR测序，测序结果进行blast比对后最终取得63个克隆。

部分客户发表文章：

1、The ZmbHLH32-ZmIAA9-ZmARF1 module regulates salt tolerance in maize.International Journal of Biological Macromolecules 253 (2023) 126978(IF =8.4)

2、WRKY46 promotes ammonium tolerance in Arabidopsis by repressing NUDX9 and IAAconjugating genes and by inhibiting NH4+efflux in the root elongation zone.DOI： 10.1038/s41438-020-0327-z(IF=8.55)

3、CsMYB60 directly and indirectly activates structural genes to promote the biosynthesis of flavonols and proanthocyanidins in cucumber.Hortic Res. doi: 10.1038/s41438-020-0327-z.(IF=5.4)

4、A WRKY transcription factor PbrWRKY53 from Pyrus betulaefolia is involved in drought tolerance and AsA accumulation.Plant Biotechnology Journal, 2019, 17:1770–1787.

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